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蕓苔素內酯的分離、提純方法

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蕓苔素內酯的分離、提純方法:
將油菜花粉用去離子水洗滌30分鐘(每克花粉用4毫升水),然后過濾,重復洗滌七次。將花粉濾餅進行冷凍干燥,使含水量<1%;再用異丙醇回流萃取1小時(每克花粉用3毫克異丙醇),并用豆苗第二節間伸長法測定其活性,直到萃取液的活性很低為止。
然后將萃取液進行真空濃縮,得花粉提取物;再用四氯化碳/甲醇水溶液進行逆流分配萃取,分取上層液(即甲醇—水溶液)進行真空濃縮。
再將濃縮物通過兩次硅膠柱層析,分別用苯—甲醇—乙酸(90∶16∶8)及甲醇—氯仿(甲醇濃度10~20%)進行洗脫,用紫外光于400nm進行跟蹤,收集有活性的洗脫液,濃縮后即得油菜素。pic
上述獲得的油菜素尚含有植物脂質,必須用高效液相色譜儀(μ—BondapakC18,甲醇—水,65∶35)進行精制,用菜豆第二節間伸長法測定其活性。通過上述方法,可從40千克花粉中獲得4毫克的油菜素內酯。pic
再用甲醇重結晶,可得結晶的油菜素內酯,熔點274~275℃,分子式C28H48O6。經質譜、紅外及X射線晶體分析油菜素內酯的立體結構式。它的化學名稱是2α,3α,22α,23α-4羥基-24α甲基-B-同型-7-氧-5α-膽甾烯-6酮。
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蕓苔素內酯(BR)結構:

BR的基本結構是一個甾體核,并在核的C-17位上有一個側鏈。根據B環中含氧官能團的性質,可分為內酯型、酮型和脫氧型(還原型)。BR生物活性與結構關系密切?;钚訠R必須具備如下結構特征:(1)A/B環為反式;(2)B環含有7位內酯和6位酮基;(3)A環上具有2位和3位兩個羥基;(4)側鏈22位23位具有羥基;(5)側鏈24位上有1~2個C的取代基。根據這些特征,目前人工合成了多種BR,如表油菜素內酯(24-epi-brassinolide)、高油菜素內酯(28-homobrassinolide)以及長效蕓苔素內酯TS303(丙酰蕓苔素內酯)。
現在國內生產的BR品種主要有兩種,一種是稱為表蕓苔素內酯(epi-BL),它在24位上的甲基的構象與BL相反,還有一種稱為高蕓苔素內酯(homo-BL),它的分子中24-位的甲基改為乙基,這兩種蕓苔素內酯在自然界均有存在。
長效蕓苔素內酯TS303(通用名稱丙酰蕓苔素內酯)的化學結構上羥基發生了變化,尤其是原來的兩個羥基改變成兩個丙?;?。

根據B環中含氧功能團的差異,BR活性的次序是內酯型>酮型>脫氧型,C6上缺少酮基則無活性;C24上取代基對活性的關系是甲基>乙基>H,C24上有亞甲基或亞乙基的也有活性;C22、C23及C24上具有α-取向基團的化合物比β-取向的活性高,在所有的這類化合物中,油菜素內酯的活性是最高的。
就植物生理活性而言,油菜素內酯>24-表油菜素內酯>高油菜素內酯>長效蕓苔素內酯;無論用任何檢測系統,在已知的天然的和合成的BR中,油菜素內酯是BR中活性最高的化合物。

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